鲁米诺-铁氰化钾化学发光法测定双嘧达莫的研究

1.实验条件的选择

（1） 混合管道长度的选择
实验发现luminol-K3Fe(CN)6化学发光反应是一快速的化学发光反应，当泵1各管的流速为1.2ml/min，泵2各管的流速为1.7ml/min时， luminol与K3Fe(CN)6经过10 cm的混合管道混合后，二者的反应已很充分了，信噪比已足够大。因此实验选择luminol与K3Fe(CN)6的混合管道长为10 cm。

（2） 反应介质及其浓度的选择
实验发现铁氰化钾氧化DIP与铁氰化钾氧化luminol的化学发光反应均在碱性介质中进行，本实验以相同pH值（pH=10）的NaHCO3-NaOH、KH2PO4-NaOH、Na2B4O7-NaOH、Na2HPO4-NaOH等一系列缓冲溶液和NaOH、KOH溶液作为反应的介质，进行了选择，实验结果表明在NaOH的反应介质中发光信号最强且稳定，因此选用NaOH溶液作为反应的介质。我们又对NaOH溶液的浓度进行了选择，如图1-2所示，当NaOH的浓度在0.01~0.1mol/L的范围时，信噪比随着浓度的增大而增强，当NaOH的浓度大于0.1 mol/L时，信噪比随着NaOH的浓度的增大而降低，因此本实验选用0.1mol/L的氢氧化钠溶液作为反应的介质。

（3）铁氰化钾浓度的选择
K3Fe(CN)6为本发光体系的氧化剂，它在化学发光过程中起着很关键的作用，实验详细考察了它的浓度对DIP测定的影响，实验结果如图1-3所示。从图可以看出，当K3Fe(CN)6浓度在0.1×10-4mol/L ~1×10-4 mol/L时，信噪比随着K3Fe(CN)6的浓度增大而增大，当的K3Fe(CN)6浓度为1×10-4 mol/L时，信噪比最大，当K3Fe(CN)6的浓度大于1×10-4 mol/L时，信噪比随着K3Fe(CN)6的浓度增大而减小，这可能是由于K3Fe(CN)6本身有颜色可以吸收光辐射的缘故。故本文选取K3Fe(CN)6的浓度为1×10-4 mol/L。

（4）鲁米诺浓度选择
在该体系中，鲁米诺为化学发光试剂，其浓度对分析信号有很大的影响，实验考察了鲁米诺浓度对信噪比的影响，如图1-4所示，鲁米诺浓度在0.5×10-6 mol/L ~ 5×10-6 mol/L时，信噪比随着鲁米诺的浓度增大而增大，当鲁米诺浓度等于5.0×10-6mol/L时信噪比最大，当鲁米诺溶液的浓度大于5.0×10-6mol/L时，信噪比反而下降，所以本文选择5.0×10-6mol/L的鲁米诺溶液。

2.校准曲线、精密度及检出限
在上述优化的实验条件下，化学发光信号与DIP的浓度在1×10-10 ~ 4×10-7g/mL的范围内成线性关系。为了提高方法的精密度和准确度，以及由于仪器条件所限，校准曲线分段绘制，其基本参数列于表1-1。根据IUPAC建议，计算得该方法的检出限为6×10-11g/mL。对1×10-8g/mL的DIP进行7次平行测量，相对标准偏差为1.1%。该体系的分析效率为60 h-1

3.干扰实验
固定DIP的浓度为1.0×10-8 g/mL，试验了常见组分对该化学发光体系测定DIP的影响。结果表明，当实验误差小于5%时，允许存在的共存物的量为：1000倍β-环糊精、尿素、乙醇；500倍蔗糖、硬脂酸镁、淀粉、葡萄糖、麦芽糖；100倍草酸、果糖；50倍柠檬酸、10倍尿酸，5倍抗坏血酸。

4.样品分析
利用本法对DIP片剂中DIP含量进行了测定。取10片DIP片剂（标示量：25mg/tablet），准确称量后，研细，混合均匀，从中取出相当于2片的粉末于烧杯中，加适量乙醇溶解后，过滤，滤液转入100ml容量瓶中，用水定容，摇匀。吸 取一定量的该溶液，用水适当稀释后，按图1-1所示流路进行样品分析，并与药典中标准方法对照，没有显著性差异。