方法名称 体外培育牛黄－胆酸的测定－薄层扫描法
仪器设备：
1 仪器
1.1薄层扫描仪
1.2涂布器
应能使吸附剂在玻璃板上手工或自动涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。
1.3点样器
一般采用微升毛细管或与之相应的点样器材。
1.4展开室
可用适合薄层板大小的专用玻璃缸，底部平底或双槽，盖子须密闭。
2 材料
2.1玻板
用10cm×10cm、10cm×15cm、20cm×10cm或20cm×20cm的规格，要求光滑、平整，洗净后不附水珠，晾干。
2.2吸附剂
硅胶g，其颗粒大小一般要求直径为10～40μm。
试样制备： 1. 对照品溶液的制备
取在105℃干燥至恒重的胆酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.48mg的溶液，作为对照品溶液。
2. 供试品溶液的制备
取本品细粉0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25ml，蒸干，残渣加20%氢氧化钠溶液10ml，加热回流2小时，冷却，加稀盐酸19ml调节ph值至酸性，用乙酸乙酯提取4次（25ml，25ml，20ml，20ml），提取液均用同一铺有少量无水硫酸钠的脱脂棉滤过，滤液合并，回收溶剂，残渣用甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。
应用范围
本方法采用薄层扫描法测定体外培育牛黄中胆酸的含量。
本方法适用于牛科动物牛bos taurus domesticus gmelin的新鲜胆汁作母液，加入去氧胆酸、胆酸、复合胆红素钙等制成的体外培育牛黄的测定。
方法原理
供试品加甲醇超声提取，放冷，补重，摇匀，滤过，续滤液加20%氢氧化钠溶液加热回流，调ph值至酸性，用乙酸乙酯提取，提取液蒸干，残渣加甲醇溶解，制成供试液，点样、展开，以30%硫酸乙醇溶液显色，用薄层扫描仪进行扫描，于波长λs=380nm，λr=650nm测量胆酸（c24h40o5）吸收度积分值，计算其含量。
试剂
1. 乙酸乙酯
2 .20%氢氧化钠溶液
3 .甲醇
4 .30％硫酸乙醇溶液
试样制备
1. 对照品溶液的制备
取在105℃干燥至恒重的胆酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.48mg的溶液，作为对照品溶液。
2. 供试品溶液的制备
取本品细粉0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25ml，蒸干，残渣加20%氢氧化钠溶液10ml，加热回流2小时，冷却，加稀盐酸19ml调节ph值至酸性，用乙酸乙酯提取4次（25ml，25ml，20ml，20ml），提取液均用同一铺有少量无水硫酸钠的脱脂棉滤过，滤液合并，回收溶剂，残渣用甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。
操作步骤
1. 薄层板制备
将吸附剂1份和水3份在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的气泡后，倒入涂布器中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.25～0.5mm）取下涂好薄层的玻板，于室温下，置水平台上晾干，在反射光及透射光下检视，表面应均匀，平整，无麻点、无气泡、无破损及污染，于110℃烘30分钟，冷却后立即使用或置干燥箱中备用，或用商品预制板。
2. 点样
精密吸取供试品溶液 2μl、对照品溶液 1μl与 3μl，分别交叉点于同一硅胶g薄层板上，如用点样器点样到薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边1.0～1.5cm，样点直径一般不大于2mm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。
3. 展开
将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中，以异辛烷一乙酸丁酯一冰醋酸一甲酸（8：4：2：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以30%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰，取出。
4. 含量测定
在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，选择反射方式，采用吸收法，进行扫描，波长：λs=380nm，λr=650nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算。
用外标法测定时，若对照品各数据点在校正曲线上呈一通过原点的直线时，可用一点法校正，如不通过原点通常宜采用二点法校正，必要时用多点法校正。