我们为您提供化工资料查询,分享技术资料和最新研究成果!

没食子酸质量检测

规格:99%
包装:25kg/桶
最小购量:1kg
CAS:149-91-7
分子式:C7H6O5
分子量:170.12

HPLC法测定山茱萸中没食子酸的含量
 
童荣生(四川省医学科学院·四川省人民医院药剂科,成都 610072)           

摘要:目的:建立山茱萸药材中没食子酸的含量测定方法,以控制其质量。方法:采用高效液相色谱法,以Discovery C18(5μm,250×4.6mm)为色谱柱,甲醇-0.1%磷酸溶液(8:92)为流动相,检测波长271nm。结果:没食子酸的进样量在0.040μg~0.400μg范围内与其峰面积值有良好线性关系(r=0.9999),平均加样回收率为100.78%,RSD为1.64%。结论:该方法简便易行、准确可靠,可用于山茱萸药材中没食子酸的质量控制。

关键词:没食子酸;高效液相色谱法;山茱萸

Determination of Gallic Acid Contained in Fructus Corni by HPLC

Abstract: Objective:To establish a method for determination of gallic acid contents in Fructus Corni by HPLC. Methods:The determination was performed on a Discovery C18 conlumn(5μm,250×4.6mm)by UV detector at 271nm with methanol-0.1% phosphoric acid(8:92)as the mobile phase at the flow rate of 1.0ml/min. Results:The amount of gallic acid was linear with its area over the range

from0.040 to 0.400μg(r=0.9999).The average recovery and the relative standard deviation of gallic acid were 100.78% and 1.64%(n=6),respectively. Conclusion:The method appeared to be sensitive,accurate and can be used for the quality control of  gallic acid in Fructus Corni.

Key words:Gallic acid;HPLC;Fructus Corni

山茱萸为山茱萸科植物。山茱萸cornus off icinalis Sieb.et Zucc.的干燥成熟果肉。它是我国40种重点常用中药材之一,具有补益肝肾、涩精固脱的功效,用于眩晕耳鸣、腰膝酸痛、阳痿遗精、遗尿尿频、大汗虚脱等症候。目前,国家标准中是用薄层扫描法测定其三萜类成分——熊果酸的含量,而没有对有机酸类成分——没食子酸进行含量测定[1]。近年来研究表明,没食子酸具有收敛、止血、止泻、杀菌、抗病毒等作用[2]。因此,本文建立了HPLC法测定山茱萸中的没食子酸的含量,为其质量控制提供依据。

1  仪器与试药

1.1 仪器   Alliance高效液相色谱仪(2690溶剂输送系统,996二极管阵列检测器,Millenium32数据管理系统,美国Waters公司);UV-2100型紫外可见分光光度计(日本岛津);十万分之一电子天平(西德Sartorius)。

1.2 试药  没食子酸为中国药品生物制品检定所提供(0831-9501),在选定色谱条件分离后,按归一化法计算得含量为99.56%。甲醇为色谱纯,磷酸为分析纯,水为重蒸馏水。山茱萸药材由成都中药材公司提供(产于四川安县)。

2  方法与结果

2.1色谱条件  色谱柱:Discovry C18(5μm,250×4.6mm),柱温:25℃。流动相:甲醇-0.1%磷酸溶液(8:92),流速:1.0ml/min。检测波长:271nm,灵敏度:0.01AUFS。

2.2检测波长的确定  取没食子酸对照品适量,用流动相稀释成10μg/ml,以流动相为空白,在200~600nm波长范围内扫描。结果表明,Cur在271nm波长处有最大吸收。

2.3 标准曲线的制备  精密称取没食子酸对照品适量,用甲醇溶解并稀释成20.0μg/ml的储备液。精密量取此储备液2.0、4.0、8.0、16.0、20.0μl进样,记录色谱图,测定其峰面积,并以峰面积值(A)对进样量(C)进行回归,得标准曲线方程为:A=2.132×106C+1.486×102,R=0.9999。结果表明,没食子酸的进样量在0.040μg~0.400μg范围内,与其峰面积值有良好的线性关系。

2.4 供试品溶液的制备  取山茱萸药材,60℃下干燥至恒重,粉碎成粗粉,精密称定1g,加50%甲醇40ml,超声提取2次,每次30min,滤过,加50%甲醇定容至100ml,用0.45μm滤膜滤过,取续滤液,进样。在选定色谱条件下,没食子酸和样品中其它组分色谱峰可基线分离,分离度大于1.5,没食子酸对照品、山茱萸药材样品色谱图见图1、图2。

图1    没食子酸对照品

图2   山茱萸样品

2.5 精密度试验  精密吸取同一供试品溶液10μl,重复进样5次,测得没食子酸峰面积的相对标准差(RSD)为0.86%。

2.6 稳定性试验  取同一样品供试液分别于0、2、4、6、8h,进样10μl,测得样品中没食子酸峰面积值的RSD为0.92% 。实验表明,样品供试液在8h内稳定性良好。

2.7 重复性试验  按拟定的含量测定方法,取同一批样品五份,分别制备样品供试液,测得没食子酸含量的RSD为1.53%。

2.8 加样回收率实验  精密称取已知含量的山茱萸粗粉(没食子酸含量为0.21%),加入一定量的没食子酸对照品,按供试品溶液制备方法操作,取10μl进样、测定,结果没食子酸的平均回收率为100.78%,RSD为1.64%(n=6)。结果见表1。

表1  加样回收率试验结果

药材量
(g)
已知量
(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
X
RSD
(%)
0.5032      1.057        0.608          1.684        103.21
0.5009      1.052        0.608          1.670        101.65
0.5024   1.055     1.216      2.264    99.42       100.78         1.64
0.5018      1.054        1.216          2.284        101.15
0.5047      1.060        1.824          2.897        100.72
0.5036      1.058        1.824          2.856        98.55

2.9 样品测定  对三批药材的含量测定结果见表2。


表2  三批药材的含量测定结果(n=3)

批号
041102
040911
050218
没食子酸含量,%
RSD,%
 0.28
1.13
0.16
1.52
0.21
1.08

3  讨论

3.1  文献报道[3-4]用薄层色谱法、HPLC法测定没食子酸的含量。本文曾参考文献用甲醇-水、甲醇-水-N,N二甲基酰胺-冰醋酸溶液为流动相,均不能很好地分离和测定山茱萸中的没食子酸含量。实验表明,以甲醇-0.1%磷酸溶液为流动相,并通过优化流动相的比例、柱温等色谱条件,可以使本品中的没食子酸峰与其它杂质峰很好地分离。

3.2  分别采用不同溶剂(乙醇、甲醇、75%甲醇、50%甲醇)、不同提取方法(回流或超声提取)、不同提取时间(0.5、1、1.5h)和提取次数(一次、二次、三次)对本品中的没食子酸进行提取研究。结果表明:本品1.0g,加50%甲醇40ml,超声提取2次,每次30min,提取效果较好且简便易行。

3.3  实验表明,本方法简便易行、灵敏准确、重现性好,可用于山茱萸药材中没食子酸的质量控制。

参考文献

[1] 国家药典委员会编.《中华人民共和国药典》(2000年版,一部)[S].北京:化学工业出版社,2000:46

[2] 张兰珍,王晓强,宣辉,等.高效液相色谱法测定叶下珠中没食子酸的含量[J].北京中医药大学学报,2000,23(6):46

[3] 雷其云,赵越平,罗洪汉,等.用薄层层析法检测鞣质[J].中国中药杂志,1997,22(5):287

[4] 许乾丽,茅向军,熊慧林,等.HPLC测定宁泌泰胶囊中没食子酸的含量[J].中成药,2001,23(9):641

Baidu
map