TLCS法测定熊胆中熊去氧胆酸及鹅去氧胆酸含量
(1)供试品:熊科动物棕熊UrsusarctosLinnaeus或黑熊SelenarctosthibetanusG.Cuvier的干燥胆。
(2)色谱条件:高效硅胶薄层板(烟台);异辛烷-异丙醚-冰醋酸-正丁醇-水(6:3:3:1.8:0.6)为展开剂;饱和硫酸氢铵的5%硫酸乙醇溶液为显色剂,喷雾显色,于110℃加热10min,在自然光下和365nm紫外光灯下检视斑点的位置。
(3)对照品溶液的配制:精密称取熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸、胆酸对照品,用甲醇溶解并制成每毫升各含1mg的溶液作为对照品溶液。
(4)样品溶液的制备:精密称取熊胆8mg,加30%氢氧化钠溶液1.5ml,于沸水浴中水解10h。用浓盐酸调pH1~2,乙酸乙酯提取(10ml×2次,5ml×2次),合并提取液,浓缩,定容于2ml量瓶中,作为样品溶液。
(5)测定:吸取样品溶液1μl与对照品溶液1μl和2μl,分别交叉点于同一薄层板上,按上述薄层色谱条件,展开,取出,晾干,显色。照薄层扫描法进行反射锯齿法扫描;熊去氧胆酸的激发波长λex=380nm,发射波长λem=450nm;鹅去氧胆酸和胆酸的λem=470nm,λex=550nm。测量样品与对照品吸收度积分值,计算,即得。