本品在105℃干燥2h后定量时含核黄素C
17H
20N
4O
698%以上①。
1．性状
本品是黄~全黄色的结晶性粉末，有轻微的臭气②。
2．鉴定试验
将本品1mg溶于10mL水中，液体呈淡黄绿色，发出很强的带黄绿色荧光，这种荧光当加稀盐酸或氢氧化钠试液，立即消失③。
3．纯度试验
（1）比旋光度 将本品避光，在105℃干燥2h后，精确地称取约50mg，加0.1mol/L氢氧化钾溶液2mL溶解，加新煮沸的冷却水5mL后，边充分混合，边加无水乙醇2mL，再加新煮沸的冷却水，定容至10mL，在30min以内测定此液的旋光度时应是
=-120~140°④。
=-120~140°④。
（2）光黄素 取本品25mg，加不含醇的氯仿10mL，充分混合，5min后过滤，其颜色不应比0.1mol/L重铬酸钾溶液颜色更深⑤。
4．干燥失重
本品在105℃干燥2h，其失重应在1.5%以下⑥。
5．强热残留物
本品的强热残留物应在0.3%以下⑦。
6．定量法
本品在105℃干燥2h后，精确地称取约0.015g，加稀释冰醋酸（1→400）800mL，在50~70℃加热溶解，冷却后加水，定容至1，000mL作为检液。另外用维生素B2标准品与试样同样操作，制作标准溶液，以水为对照，在波长445τm处测定检液的吸光度A
T及标准溶液的吸光度As之后，立即分别向两种溶液中加亚硫酸氢钠0.02g，充分混合，脱色，测定此二液的吸光度A’
T及A’s，依据下式可求出核黄素的含量。但这些操作要避开直射日光，要使用遮光容器来进行⑧。
注 解
①JPIX规定在105℃，2h为98.0%以上，FCC规定105℃2h为98~100%。
②根据结晶析出时的条件，有绢丝状、长针状、柱状、板状、束状，放射状等很多种类的结晶型，但都是很细的。如果用X射线分析有两种不同的结晶，mp为282℃及291℃。几乎无臭或稍有臭味有苦味。无吸湿性，极难溶解在水中。但对水的溶解度，由于结晶形而有很大差异。在有机溶剂中一般是难溶的，几乎不溶于氯仿、乙醚，但易溶于吡啶、酚中。在中性和酸性时是极稳定的，查在碱性中迅速分解。特别在光存在下，分解更快，变成光黄素。对氧化剂是比较稳定的。由于还原剂会失去黄色和荧光。本品的饱和水溶液是中性。
③水溶液呈特异的淡黄绿色，发出很强的荧光。这种荧光在紫外线下观察，显著增强。此荧光的强度在pH4~8下基本是稳定的，在pH4以下或pH8以上变弱，荧光光谱的极大波长在514~565nm之间。
④干燥条件与定量法相同，改成105℃，2h。代替以前用的0.1mol/L氢氧化钠溶液，现在改成0.1mol/L氢氧化钾溶液，本品的旋光性在碱性中强，在中性、酸性中极弱，所以在碱性下测定。
⑤在碱性中受光分解生成光黄素，此试验是对可能混入的光黄素进行检验。用氯仿振荡，核黄素不溶解，但光黄素溶解，所以利用此性质之差进行试验。氯仿如含乙醇，核黄素也少量溶解，所以判断困难。比较多用的重铬酸钾和光黄素，色调略不同，但规定的色调，与光黄素150μg/g（0.015%）相对应。
⑥JPIX、FCC也相同。
⑦0.35以下与FCC相同，在JPIX为0.2%以下。
⑧本品由于次硫酸钠还原并脱色，所以从脱色前后的吸光度之差可计算其纯度。本品的λmax是220~222nm、265~267nm、372~374nm、444~446nm，分子吸光系数是30,870（220nm），27，700（260nm）、12，200（450nm）（在pH值为7.0的磷酸缓冲液中溶解时）。本品的λmax与文献略有差异，因此在定量时，对维生素B
2标准品也同样操作，进行比较。在本文中虽没有明显表示，但加次硫酸钠0.02g是针对检液，标准溶液的各约为5mL。
由于次硫酸钠或氯化亚锡的还原或接触还原，本品经半醌型的一氢核黄素变成无色型的二氢核黄素。无色、无荧光。但是在空气中振荡混合，再被氧化返回到核黄素。