4-甲基咪唑的测定（薄层法）

1.试剂与溶液
1.1三氯甲烷-无水乙醇混合溶液（8：2）
1.2碳酸纳（HGB1293）.10%溶液.
1.3硫酸（GB/T625）.0.05ｍｏｌ/L溶液.
1.4硅胶（GF254）（薄层层析用）.
1.5碳酸氢钠（GB/T640），
1.6碳酸氢钠（/改变台）8%溶液.
1.7展开剂［乙醚-三氯甲烷-甲醇（8：2：2）］.
1.8显色剂
　　 A：0.5%对氨基奔磺酸的2%盐酸溶液：
　　 B：0.5%亚硝酸钠溶液.
　　 A与B临用前等量混合.
1.9 4-甲基咪唑标准溶液
　　　称取样品4-甲剂咪唑（精1确至0.1000ｇ）置于100ｍｌ，容量瓶中，加95%乙醇定容至刻度，此兴每ｌｍｌ相当于1.0ｍｇ4-甲基咪唑.
临用前在用95%乙醇稀释成每ｌｍｌ相当于0.1ｍｇ的4-甲基咪唑标准液.
2.方法步骤
2.1提取
　　　 称取样品5ｇ（准确至0.01ｇ）加15ｍｌ水溶解，加10%碳酸钠15ｍｌ，于25ｍｌ，分液漏斗中，加三 氯甲烷一无水乙醇混合溶液80ｍｌ，剧烈振摇4ｍｉｎ～5ｍｉｎ，待完全分层后，将三氯甲完-无水乙醇提取液收集于250ｍｌ，具塞三角瓶中中，上述水层现动脑筋三氯甲烷-无水乙醇混合溶液70ｍｌ，提取一次，合并提取液，提取液中加入0.05ｍｏｌ/L硫酸20ｍｌ，剧烈振摇60次，分取水层，此液于60℃～70℃水浴上浓缩至2ｍｌ-3ｍｌ，缓缓加入碳酸氢钠细粉约0.2ｇ，使不产生气泡为止，用乙醇定溶到5ｍｌ.
2.2制板
　　 称取硅胶（GF254）3ｇ，加80%碳酸氢钠溶液IｍL，蒸馏水6ｍI，混匀涂于125ｍｍⅹ85ｍｍ薄板车，在空气中自然干燥2ｍｉｎ，取出后放入干燥器备用.
2.3点样
　 将4-甲基咪唑标准标准液10ｕｌ，20ｕI.30ｕｌ及样品稀释液100ｕｌ分别点薄板上 将薄板在展开剂中展至溶剂前沿达10Cｍ，取出薄板，吹干后用新配的剂进行喷雾，在5ｍｉｎ~10ｍｉｎ内，4-甲基咪唑的黄色班点可达最溶度，并稳定数小时，根据班点大小和颜色的深浅于标准班点比较，确定样品中4-甲基咪唑的含量.

可乐中4-甲基咪唑含量测定：
将含有焦糖色素的样品经固相萃取柱（XTR>500 mg）固相萃取，样品过柱后，用有机溶剂洗脱，洗脱液浓缩后，用微量点样器直接在层析材料聚酰胺薄膜上点样，在装有相应配比的展开剂中上行展开，碘蒸汽显色后肉眼直接观察，如果在比移值0.5~0.7之间同时观察到比移值与标样相同的棕色斑点，则认为该被测物中含有4-甲基咪唑。

　　该方法可以实现快速定性检测样品是天然酿造还是由人工配制，特别适合对酱油、醋、可乐等含有焦糖色素的样品进行检测。展开后的薄层板可长期保存以备复查，可应用薄层扫描仪进行测定。

论文1：气相色谱法测定酱油中的4-甲基咪唑.pdf
论文2：毛细管气相色谱法测定酱油中4-甲基咪唑的含量.pdf