DL-高半胱氨酸硫内酯盐酸盐
1 范围
本标准规定了DL-高半胱氨酸硫内酯盐酸盐的要求、试验方法、检验规则和标志、标签、包装、运输、贮存条件。
本标准适用于以DL-高半胱氨酸为原料，铅合金作阴电极、石墨为阳电极，在盐酸溶液中电解合成制得DL-高半胱氨酸硫内酯盐酸盐。主要用作生化试剂。
分子式：C4H7NOS.HCl
相对分子质量：156.63（根据1997年国际相对原子质量表）。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 191-2008,ISO 780:1997,MOD 包装储运图示标志
GB/T 601－2002 化学试剂 标准滴定溶液的制备
GB/T 602-2002,ISO 6353:1982,NEQ 化学试剂 杂质测定用标准溶液的制备
GB/T 602-2002,ISO 6353-1:1982,NEQ 化学试剂 试验方法中所用制剂及制品的制备
GB/T 617-2006,ISO 6353-1:1982,NEQ 化学试剂 熔点范围测定通用方法
GB/T 6682-2008,ISO 3696:1987,MOD 分析实验室用水规格和试验方法
《中华人民共和国药典（2005年版一部）》
3 要求
DL-高半胱氨酸硫内酯盐酸盐的要求应符合表1规定。
表1 DL-高半胱氨酸硫内酯盐酸盐的要求
项 目 质量指标
合格品 优级品
外观 白色或微带黄色结晶性粉末 白色结晶性粉末
鉴别试验（红外光谱） 应与工作标准图谱一致 应与工作标准图谱一致
熔点/℃ 199.0～203.0 199.5～202.0
干燥失重的质量分数/% ≤ 0.5 0.4
铁离子（以Fe3+计）/(mg/kg) ≤ 20 10
重金属（以Pb计）/(mg/kg) ≤ 10 10
含量(HPLC)的质量分数/% ≥ 98.5 99.5
注：a如客户有特殊需求时,供需双方可协商在商务合同中约定。
4 试验方法
4.1 安全提示
本试验方法使用的部分试剂具有毒害性和腐蚀性，操作者须小心谨慎！如溅到皮肤上应立即用水冲洗，严重者应立即治疗。
4.2 一般规定
本标准所用的试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和符合GB/T 6682规定的三级水。试验中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按GB/T 601-2002、GB/T 602-2002、GB/T 603-2002的规定制备。
4.3 外观的测定
在自然光线下目测。
4.4 鉴别试验 红外光谱法
4.4.1 方法原理
当一束具有连续波长的红外光照射到某一物质时，该物质分子中的原子或原子团振动的偶极距发生变化，产生共振而吸收一部分光能，将供其透过的光用单色器进行色散，就可以得到红外吸收光谱。根据不同物质的特征吸收光谱定性。
4.4.2 仪器设备和材料
4.4.2.1 自动红外扫描仪
4.4.2.2 分析天平 感量 0.1mg/0.01mg；
4.4.2.3 红外快速干燥箱；
4.4.2.4 压片机；
4.4.2.5 玛瑙研钵；
4.4.2.6 真空泵；
4.4.2.7 筛子(筛孔大小为 0.074mm)；
4.4.2.8 溴化钾晶片。
4.4.3 试剂
4.4.3.1 溴化钾 AR。
4.4.4 样品制备
4.4.4.1 溴化钾晶片
取干燥的溴化钾细粉（过筛孔大小为0.074mm筛）约200-300mg,置于直径为13mm的压片模具中，均匀铺展，抽真空约2min，加压至（0.8±106）kPa（约8T/cm2～10T/cm2）,保持压力2min，撤去压力并放气取出制成的空白片。（目视空白片应呈透明状。）
4.4.4.2 供试品晶片
取供试品约1mg～1.5mg,置于玛瑙研钵中，取干燥的溴化钾细粉（过筛孔大小为0.074mm筛）约200-300mg与样品充分混匀,置于直径为13mm的压片模具中，均匀铺展，抽真空约2min，加压至（0.8±106）kPa约（8T/cm2～10T/cm2）,保持压力2min，撤去压力并放气取出制成的样品片（目视样品片应呈透明状）。
4.4.5 测定
4.4.5.1 溴化钾晶片的测定
开机测定样品按仪器说明书的操作方法进行，将溴化钾晶片置于4000cm-1～400cm-1的红外自动扫描仪扫描，得空白红外光图谱。
4.4.5.2 供试品压片的测定
开机测定样品按仪器说明书的操作方法进行，将供试品压片置于4000cm-1～400cm-1的红外自动扫描仪扫描，得样品红外图谱（仪器已自动扣除空白红外图谱）。
4.4.6 鉴别（定性）
将供试品的红外图谱（主要吸收峰）与工作标准品图谱对照，应一致。
其它要求与注意事项，可以参照《中华人民共和国药典（2005年版一部）》中的附录V的C《红外分光光度法》（附录28页）。
4.5 熔点的测定
4.5.1 方法原理
以加热的方式，使熔点管中的样品从低于其初熔时的温度逐渐升至高于其终熔时的温度，通过仪器自动显示的初熔及终熔的温度，以确定样品的熔点范围。
4.5.2 仪器设备
4.5.2.1 WRS-2A 熔点仪；
4.5.2.2 封口玻璃毛细管（符合中国药典）。
4.5.3 测定
设定初始温度为189℃,升温速率为1.5℃/min，其它按GB/T617-2006规定进行。其它要求与注意事项，可以参照《中华人民共和国药典（2005年版一部）》中的附录Ⅶ的C《熔点测定法》（附录39页）规定。
4.6 干燥失重的测定
4.6.1 方法原理
供试品在105℃下干燥至恒重。由减失的重量和取样量计算供试品的干燥失重。用质量百分比来表示。
4.6.2 仪器设备
4.6.2.1 101-1A 电热恒温干燥箱；
4.6.2.2 分析天平（METTLER TOLEDO AB204-S）；
4.6.2.3 扁形称量瓶；
4.6.2.4 干燥器。
4.6.3 测定
4.6.3.1 称扁形量瓶重，在 105℃±2℃的烘箱中干燥不少于 2h，然后放在干燥器中冷却30min，进行称量，称准至 0.0001g。重复干燥（第二次干燥时间不少于 1h）及称量，重复操作直至两次连续称量间的差数不超过 0.0003g。用恒重扁形量瓶精密称取样品 1g，称准至0.0001g。
4.6.3.2 将带有试样的恒重扁形量瓶放在 105℃±2℃烘箱中干燥不少于 2h，然后放在干燥器中冷却 30min，进行称量，称准至 0.0001g。重复干燥（第二次干燥时间不少于 1h）及称量，重复操作直至两次连续称量间的差数不超过 0.0003g。其它要求与注意事项，可以参照《中华人民共和国药典（2005年版一部）》中的附录Ⅸ的G《干燥失重测定法》（附录47页）规定。
4.6.4 计算
供试品的干燥失重X质量百分数〔%〕按（1）式计算：
m1- m2
X=----------------×100%……………………（1）
m1- m
m1——样品+称量瓶的质量；
m2——烘干后的质量；
m ——空称量瓶的质量。
所得结果应保留2位有效数值，两个结果的数值平均差不大于0.3%。
4.7 铁离子检查法 目视比色法
4.7.1 方法原理
用定量的供试品，稀释在规定的试剂溶液中显色，立即与标准的定量铁溶液比较，稀释的供试品溶液色不得深与标准的定量铁溶液色。
4.7.2 仪器设备
一般实验室玻璃仪器
4.7.3 试剂
4.7.3.1 稀盐酸 10%盐酸(体积分数)；
4.7.3.2 硫氰酸铵 30%硫氰酸铵(质量体积比)；
4.7.3.3 过硫酸铵 AR；
4.7.3.4 硫酸铁铵 0.1mg/kg 铁标准溶液。
4.7.4 测定
4.7.4.1 标准溶液的制备
精密移取1.0ml、1.5ml、2.0mL0.01mg/kg铁标准溶液(临用前，由0.1mg/kg铁标准溶液稀释成0.01mg/kg铁标准溶液),于50ml比色管中，用水使成25mL，加入4ml盐酸和50mg过硫酸铵，用水稀释至35mL，再加3mL硫氰酸铵，用水稀释至50mL，摇匀，备用。
4.7.4.2 供试品溶液的制备
样品溶液：称取1.0g样品于50mL比色管中，加水溶解稀释成25mL，加入4ml盐酸和50mg过硫酸铵，加水稀释成35mL，再加3mL硫氰酸铵，用水稀释至50mL，摇匀，立即与标准管比较。
4.7.4.3 比色
样品溶液管的颜色不得比定量铁标准溶液色深。
其它要求与注意事项，可以参照《中华人民共和国药典（2005年版 一部）》中的附录Ⅸ的D《铁盐检查法》（附录45页）规定。
4.8 重金属检查法 目视比色法
4.8.1 方法原理
重金属离子与负二价硫离子在乙酸介质中生成有色硫化物沉淀。重金属元素含量较低时，形成稳定的暗色悬浮液，可用于重金属的目视比色法测定。
本方法用定量的标准铅溶液稀释成比色液，与制备的供试品溶液进行比色。稀释的供试品溶液色不得深与标准的定量铅溶液色。
4.8.2 仪器设备
一般实验室玻璃仪器
4.8.2.1 SX2
-2.5-16 马弗炉（或同等仪器）；
4.8.2.2 HHS 电热恒温水浴锅。
4.8.3 试剂
4.8.3.1 硝酸铅
0.1mg/kg铅标准溶液(临用前，由0.1mg/kg铅标准溶液稀释成0.01mg/kg铅标准溶液)。
4.8.3.2 醋酸缓冲液 pH=3.5；
4.8.3.3 硫代乙酰胺试液
硫代乙酰胺4g，加水使溶解成100mL，置于冰箱中保存。临用前取混合液（由1mol/L氢氧化钠溶液15 mL，水5.0mL，及甘油20 mL组成）5.0 mL，加上述硫代乙酰胺溶液1.0 mL，置水浴上加热20s,冷却，立即使用。
4.8.3.4 硝酸 AR
4.8.3.5 硫酸 AR
4.8.3.6 盐酸 AR
4.8.3.7 氨试液
取浓氨水400mL，加水使成1000mL，即得。
4.8.3.8 酚酞指示液
取酚酞1g，加乙醇100 mL，使溶解，即得。
4.8.4 测定
4.8.4.1 标准溶液的制备
取配制供试溶液的试剂于50mL的坩埚中，蒸干，加醋酸缓冲液（PH=3.5）2mL，水15mL，微热溶解，移至25ml比色管中，加1.0mL 0.01mg/kg铅标准溶液(临用前，由0.1mg/kg铅标准溶液稀释成0.01mg/kg铅标准溶液) 加水稀释成25mL，即得标准溶液。
4.8.4.2 供试品溶液的制备
精密称取1.0g样品于50mL的坩埚中，在电炉上缓缓灼烧至完全炭化，放冷，加硫酸0.5～1.0 mL使润湿，低温加热至硫酸除尽，加硝酸0.5mL，蒸干，至氧化氮蒸气除尽后，放冷。于550℃±50℃的马弗炉内灼烧至完全灰化。放冷，加盐酸2mL，置水浴上蒸干后加15mL水，滴加氨试液至对酚酞指示液显中性，再加醋酸缓冲液（pH=3.5）2mL，微热溶解后，移至25mL比色管中，加水稀释成25mL，即得样品溶液。
4.8.4.3 比色
在样品管与标准管中，分别加硫代乙酰胺试液各2mL，摇匀，放置2min,同置白纸上，自上向下透视，样品管的颜色不得比标准管更深。其它要求与注意事项，可以参照《中华人民共和国 药典（2005年版 一部）》中的附录Ⅸ的E《重金属检查法》（附录45页）规定。
4.9 含量的测定 高效液相色谱法
4.9.1 方法原理
将定量的供试品稀释以乙腈+流动相溶液（磷酸二氢钾、庚烷磺酸钠和磷酸与水溶解液），用高效液相色谱仪于220mm处检测。
4.9.2 仪器设备
4.9.2.1 一般实验室玻璃仪器（主要有 1000mL 液相专用试剂瓶，抽滤瓶等）；
4.9.2.2 高效液相色谱仪 DIONEX P680 HPLC Pump
4.9.2.3 分析天平 感量为 0.0001g；
4.9.2.4 2XZ-1 真空泵；
4.9.2.5 AS3120 超声波。
4.9.3 试剂
4.9.3.1 磷酸二氢钾：AR；
4.9.3.2 庚烷磺酸钠:HPLC 级；
4.9.3.3 磷酸:25%磷酸(体积分数比)；
4.9.3.4 氢氧化钠:10mol/L 氢氧化钠；
4.9.3.5 乙腈: HPLC 级。
4.9.4 测定：
4.9.4.1 流动相配制
4.9.4.1.1 A 溶液
1000mL容量瓶中加入0.68g磷酸二氢钾，再加入1.01g庚烷磺酸钠，再加入25%的磷酸26.8mL，加水适量溶解，用水稀释到刻度，再用10mol/L的氢氧化钠调pH至3.0，抽滤。
4.9.4.1.2 B 溶液
取乙腈250mL。
4.9.4.1.3 将制备的 A 溶液和 B 溶液配制成 A:B=4:1（体积分数）比例的流动相溶液。摇匀，备用。
4.9.4.2 供试品制备
称取样品约 50mg 置 25mL 容量瓶中，用流动相溶解并稀释到刻度。摇匀，备用。
4.9.4.3 HPLC 定量测定
4.9.4.3.1 HPLC 色谱条件
测试前HPLC色谱仪应符合下列条件：
a 色谱柱：XB-C18（柱长250mm，内径4.6 mm，粒径5μm）；
b 检测器：UVD；
c 流动相：A:B(4:1)体积分数；
d 流动相流速：1.0ml/min；
e 柱温：30℃；
f 检测波长：220nm；
g 进样量：10μL。
4.9.4.3.2 取 10μL 样品注入液相色谱仪，记录色谱图，按面积归一法计算。
4.9.4.4 计算
4.9.4.4.1 供试品 DL -高 半 胱 氨 酸 硫 内 酯 盐 酸 盐 的含量按（2）式计算：
Ai
w =-----------×100%………………………………（2）
∑Ai
w ——DL-高半胱氨酸硫内酯盐酸盐的百分含量 ， %；
Ai — —DL-高半胱氨酸硫内酯盐酸盐的峰面积 ；
Ai ——总的峰面积。
4.9.4.4.2 测定结果保留至小数点后 2 位。用平行测定的算术平均值表示，两次测定结果的算术平均
差不得大于 0.5%。
其它要求与注意事项，可以参照《中华人民共和国 药典（2005年版一部）》中的附录Ⅸ的E《高效
液相色谱法》（附录33页）规定。
5 检验规则：
5.1 DL-高半胱氨酸硫内酯盐酸盐应由本公司质量检验部门进行检验，应保证出厂的 DL-高半胱氨酸硫内酯盐酸盐都符合本标准的要求，每批出厂的 DL-高半胱氨酸硫内酯盐酸盐都应有质量证明书。
5.2 用户有权按照本标准的各项规定，检验所收到的 DL-高半胱氨酸硫内酯盐酸盐的质量是否符合本标准的要求。
5.3 取样方法：
用取样器从每批中取样，当N≤3时（N指总桶数）全部取样，当3≤N≤300时取 n +1件。取不少于全检量的六倍于容器中混匀（全检量约为10g）。分成两份，贴上标签，注明: 生产厂名称,产品名称，批号，生产日期，取样日期等。一份由检验部门进行检验，一份留样。
5. 4 若检验结果中有一项指标不符合本标准要求时，应重新自两倍量的包装中取样复检，重新检验的结果中，即使只有一项指标不符合本标准要求时，则整批 DL -高 半 胱 氨 酸 硫 内 酯 盐 酸 盐 为 不 合 格品 。
5.5 当供需双方对产品的质量发生争议时,可由双方协商解决或由选定的仲裁机构按本标准规定的检验方法进行仲裁检验。
6 标志、包装、运输、贮存
6.1 标志
产品的外包装应有产品名称、生产厂家、规格、净重等标志，防潮、防强晒等标志应符合GB/T 191的规定。
6.2 包装
用纸板桶包装,内衬二层塑料袋,每桶净重25kg。净含量单件允许偏差1%，每批产品平均偏差应大于或等于零。
6.3 运输和贮存
产品应贮存于阴凉、干燥、通风处。运输时严防雨淋，强晒。不得与有毒有害及其它污染物品混装混运。在规定的贮运条件下，DL -高半胱氨酸硫内酯盐酸盐的保证期 ： 从生产日期算起为二年 。