本品在定量时含鸟苷5’-磷酸二钠(C10H12N5Na2O8P)97~102%。
1.性状
本品为无色~白色的结晶,白色的结晶性粉末或粉末,有特殊的味①。
2.鉴定试验
(1)取本品20mg,加0.01mol/L盐酸100mL,溶解。取10mL,加0.01mol/L盐酸定容至100mL,其溶液在波长265±2nm中有极大吸收峰和在波长270nm和280nm处有特殊的吸收峰②。
(2)取本品的水溶液(3→710,000)3mL加二羟基甲基乙醇溶液(1→10)0.2mL,然后加硫酸铁铵盐酸溶液(1→1,000)3mL,在水浴中加热10min时呈绿色③。
(3)取本品水溶液(1→100)5mL,当加氧化镁2mL时不生成沉淀。再加硝酸7mL加热煮沸10min后加氢氧化钠试液中和,此时溶液呈磷酸盐的常规鉴定试验反应④。
(4)本品呈钠盐的常规鉴定试验反应⑤。
3.纯度试验
(1)溶解性 将本品0.1g溶于10mL水时,无色,其浊度应在透明以下。
(2)酸碱性 本品的水溶液(1→20)的pH值,用玻璃电极法测定,应是7.0~8.5。
(3)铵盐 将本品0.1g装入小试管,加氧化镁50mg及水1mL,在试管内悬吊用水润湿的红色石蕊试纸,盖好试管塞,在水浴上加热5min,石蕊试纸不应变蓝⑥。
(4)砷 取本品0.5g,加水5mL,作为检液,进行砷的常规试验时应符合要求⑦。
(5)重金属 将本品2g静置加热炭化后,用不超过500℃的温度灰化,加盐酸2mL,在水浴上蒸发至干,在残留物中加稀醋酸4mL和水20mL溶解,进行过滤,滤纸上的残留物每次用5mL水洗,共洗3次,将洗液合并到滤液中,加水定容至50mL。取25mL作为检液,进行重金属的常规试验,其量应在0.002%以下⑧。
(6)氨基酸 取本品的水溶液(1→1,000)5mL,加茚三酮试液1mL,加热3min时不应显色⑨。
(7)吸光率 本品的0.01mol/L盐酸溶液(1→50,000)的波长250nm、260nm及280nm的吸光率测定为A1、A2和A3时,A1/A2是0.95~1.03,A3/A2应是0.63~0.71⑩。
(8)引用其它核酸分解物“5’-肌苷酸钠“的纯度试验(8) 。
4.干燥失重
将本品在120℃干燥4h,其失重应在25%以下 。
5.定量法
精确称取本品约500mg,加0.01mol/L盐酸定容至1,000mL,然后取此液10mL,加0.01mol/L盐酸定容至250mL作为检液。将0.01mol/L盐酸为对照,在液层的长度10cm,波长260nm条件下测吸光率A,根据下式可求出鸟苷-5’-磷酸二钠的含量 。
注 解
①本品有特殊的鲜味,与L谷氨酸钠共存,其鲜味明显增强,本品易溶于水,几乎不溶于乙醇以及其它有机溶剂。
②对鸟苷酸的鉴定。鸟苷酸在0.01mol/L盐酸溶液中紫外部吸收λmax是265±2nm。从波长270nm到280nm是稍微平坦的吸收带。鸟苷酸的紫外部吸收是由于其碱基的鸟嘌呤π电子的迁移所致,与鸟嘌呤自体的吸收光谱不同。鸟苷也具有同样吸收谱。
③、④、⑤(→同5’-核糖核苷酸钠)。
⑥NH3的检测界限是约20μg。
⑦As2O3为2ppm以下。
⑧本品在醋酸酸性中胶化,所以灰化处理后进行试验。限度为20ppm。
⑨检测限量是1μg。
⑩对其它紫外线吸收物的混入加以限制。
本品的Rf值是0.12,鸟苷及鸟嘌呤分别是0.68和0.75。鉴定限量分别为01和0.05μg。
利用费雪滴定法定量是困难的,所以用干燥失重法进行定量,本品含4~7分子的结晶水,对应的理论值是15.04~23。65%。
289.8是在鸟苷酸的λ260nm的吸光率 ,对应吸光系数11800。
将(1)和(2)式及干燥物含量补充项组合得到此式。