生物胺检测方法
胺的分析方法包括HPLC、TLC和酶联免疫分析等。组胺等生物胺含有-NH2能形成氢键,所以常用的方法是HPLC-FLD、HPLC-UV。国内没有同时测定多种生物胺(8种以上)的检测方法。
1国内文献有关生物胺的测定方法
采用高效液相色谱法,以1,6-己二胺为内标,测定柿子中的精胺、亚精胺、尸胺和腐胺。样品经丹磺酰氯衍生,硅胶柱净化,LichrosorbNH2柱(5µm,200mm×4.0mm)分离后,以氯仿:乙酸乙酯:三乙胺(98.4:1.5:0.1)为流动相,流速为1.5mL•min-1,荧光检测器检测。激发波长为336nm,发射波长为495nm,精胺、亚精胺、尸胺和腐胺的线性相关系数均大于0.99,其回收率分别为98.99%、94.02%、96.46%和105.44%。生物胺定量检测限1—5mg•kg-1
2国外文献有关生物胺的测定方法
2.1 7-氟-4-硝基苯并二唑柱前衍生/毛细液相色谱-串联质谱法测定生物胺
用7-氟-4-硝基苯并二唑(NBD)柱前衍生/毛细液相色谱-串联质谱法测定生物胺。生物胺包括色胺、组胺和胍丁胺,进行衍生反应后,在毛细柱(20m*0.25mmC85μm)上分离,选择电喷雾离子化,碰撞诱导解离(CID)得到特征的子离子。胍丁胺是一种潜在的神经递质。胍丁胺的检测限为0.6ng•ml-1(信噪比=3),在15-1000ng•ml-1浓度范围内,线性相关系数为0.9997。此方法优点是能准确地定性定量,但对仪器要求较高,经济性和普及性都不好,测定的胺种类较少。
2.2丹酰氯(Dansylchloride)柱前衍生高效液相色谱法测定生物胺
HPLC检测香肠中的色胺,苯乙胺,腐胺,尸胺,组胺,5-羟基色胺,酪胺,亚精胺和精胺。用高氯酸处理、丹酰氯衍生后,用氨水去除尸胺附近的干扰峰。C18反相色谱柱梯度分离,流动相为乙腈:甲醇:水:乙酸=43:30:26:1。紫外检测器(λ=254nm),流速为1.0mL•min-1,该方法对于单个胺的检测限是1-5mg•kg-1。线性相关系数都要大于0.9999。丹酰氯衍生法是一种简单,可靠,实用的方法,选用微波反应系统能大量缩短实验时间,衍生产物稳定。