鞣花酸-HPLC检测方法

鞣花酸是一种新型保健品，是一种植物多酚类化合物，广泛存在于自然界各种软果、坚果等植物果实中，对化学物质诱导癌变及其他多种癌变有明显的抑制作用。 

测定鞣花酸的方法很多，有反滴定法、分光光度法、色谱-质谱联用技术等。现建立了HPLC法测定鞣花酸的含量，该法准确，分离效果好，回收率高。 

方法如下：Agilent 1200HPLC液相色谱仪；十万分之一电子天平；鞣花酸对照品含量 >95%；甲醇、乙腈(色谱纯，默克公司生产)；水为超纯水。 

色谱条件： 

色谱柱：BDS C18柱(150mm×46mm，5μm)；流动相：1.2%磷酸溶液：乙腈=85：15；检测波长：254nm；流速1.0ml/min；柱温：室温；进样量：20μL。在此条件下，鞣花酸主峰的出峰时间小于10min。 

系统适用性试验： 

在上述液相色谱条件下，所得液相色谱图中，主峰与相邻杂质峰的分离度大于1.5，符合要求。 

对照品溶液的制备： 

精确称取鞣花酸对照品10mg，用约80ml色谱甲醇转移至100ml容量瓶中，超声5min，冷却至室温，甲醇定容至100ml刻度，摇匀。 

供试品溶液制备： 

精密称取鞣花酸样品10mg，置于10ml小烧杯中，用约80ml色谱甲醇转移至容量瓶中，超声5min，冷却至室温，甲醇定容至100ml，摇匀，作为供试品溶液。

鞣花酸-UV检测方法

鞣花酸(ellagic acid)又名六羟基联苯二酸二内酯，是一种高附加值的林产精细化工品。鞣花酸广泛存在于植物界，也可通过鞣花单宁降解以及由没食子酸或没食子酸酯合成。鞣花酸熔点高(>360℃)，不溶于水且难溶于大多数有机溶剂。鞣花酸在乙醇中的溶解度试验，结果表明100ml乙醇中仅能溶解20mg鞣花酸。鞣花酸的难溶性给定量分析时试液的配制带来一定难度。 

采用紫外分光光度法测定鞣花酸含量，针对鞣花酸不溶于水和难溶于多数有机溶剂的难题，提出了将鞣花酸试样溶于适量稀碱配制分析试液的方法；确定了鞣花酸试液的紫外特征吸收波长；验证了试液浓度与吸光度之间线性关系；检验了测定值的稳定性；测算了测量误差。 

检测方法如下： 

1 鞣花酸：纯度98.7%，氢氧化钠：分析纯，水：重蒸馏水。 

2 仪器：Agilent 8453紫外分光光度计、万分之一电子天平。 

3 分析试液的配制 

先将鞣花酸溶于稀碱的方法配制分析试液：取0.01g鞣花酸，精密称定，在常温搅动下，滴加0.1mol/L NaOH，直至全溶，共用3.5ml，即定为最低的用碱量。将此鞣花酸-碱溶液用水稀释定容为100ml，作为分析试液。 

吸取分析试液15ml，加水稀释定容至200ml，测定其紫外光谱，并与鞣花酸-乙醇溶液的紫外光谱进行对比，鞣花酸-乙醇溶液在255nm和366nm处有2个吸收峰，而分析试液的短波吸收峰分裂为2个峰，长波吸收峰则左移至357nm处。这与以往文献报道在鞣花酸-乙醇溶液中加入乙酸钠后变化情况类似，同样是短波吸收峰分裂为2个峰，长波吸收峰由366nm移至355nm。根据这一特性，本研究采用实测的357nm作为鞣花酸特征吸收峰的测定波长。