附录A
（规范性附录）
栀子苷检测方法
A.1栀子苷的测定
A.1.1试剂和材料
所需试剂和材料如下：
——乙腈：色谱纯；
——栀子苷标准品：质量分数≥99%。
A.1.2仪器和设备
高效液相色谱仪：配紫外检测器（检测波长238nm）。
A.1.3色谱条件
所需色谱条件如下：
——色谱柱：ODSC18，4.6mm×25cm，粒度5μm；或其他等效的色谱柱；
——流动相：乙腈∶水=15∶85；将150mL色谱纯乙腈与850mL水混合均匀后，用0.45μm滤膜过滤，超声脱气后备用；
——柱温：40℃；
——流速:0.7mL/min；
——进样量：10μL。
A.1.4测定步骤
A.1.4.1栀子苷标准曲线的制备
称取约0.01g栀子苷标准品（精确至0.0001g），用流动相（乙腈水溶液）溶解并定容至50mL，得到标样贮存液A。吸取0.25mL、0.75mL、1.25mL、2.0mL、2.5mL贮存液A，分别用流动相（乙腈水溶液）稀释并定容至50mL，得到5个标样。在A.1.3参考色谱条件下，对梯度浓度的标样进行测定，重复实验两次，得到标样平均峰面积值。以标样峰面积为纵坐标，标样的栀子苷质量浓度（g/mL）为横坐标，做标准曲线。
A.1.4.2试样液的制备
称取适量试样（精确至0.0001g），用流动相（乙腈水溶液）溶解并定容至50mL，所得溶液用0.45μm滤膜过滤，滤液备用。
A.1.4.3测定
技术指标1的测试方法文件

在A.1.3参考色谱条件下，对试样液进行测定，根据栀子苷标准品的保留时间定性。
重复进样一次，得到栀子苷平均峰面积值。根据标样峰面积和标样的栀子苷质量浓度之间的线性关系，得到试样液中栀子苷的质量浓度（g/mL）。若试样液中栀子苷浓度（g/mL）不在标准曲线范围内，则应调整试样液的浓度或者重新设计标准曲线。
A.1.4.4结果计算
试样中栀子苷的含量X1按公式（1）计算：
              C1
X1=------------×100%…………………………（1）
              C2
式中：
X1——试样中栀子苷的含量，%；
c1——根据标准曲线求得的栀子苷浓度，单位为克每毫升（g/mL）；
c2——试样液的浓度，单位为克每毫升（g/mL）。
实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于0.1%。