反相高效液相色谱法同时测定乳酸及乳酸甲酯
卢定强, 徐　蓓, 李　晖, 肖洁瑾

摘要:乳酸及乳酸甲酯是重要的有机化工原料。在由乳酸合成乳酸甲酯的绿色化工工艺研究过程中, 为了优化反应条件, 建立了一种同时分离测定乳酸连续酯化反应体系中乳酸和乳酸甲酯的反相高效液相色谱法。HPLC分析条件为:Prevail C18色谱柱, 以V〔N aH2 PO4 /H3 PO4 缓冲液(pH2. 0)〕:V(甲醇) =90∶10 为流动相, 流速为1. 0 m L m in- 1, 检测器为示差折光检测器。在进样量为0. 2～ 20 μg成良好的线性关系。乳酸的加样回收率为94.55% ～ 106.94%, 相对标准偏差为1. 23% ～ 2.01%;乳酸甲酯的加样回收率为91. 03% ～ 109. 0%, 相对标准偏差为1.25% ～ 2. 88%。该方法准确、简捷、可靠。

1. 1　仪器和试剂
LB - 05平流泵(北京卫星制造厂);R ID - 10A示差折光检测器(日本SH IMADZU 公司);N - 2000双通道色谱工作站(浙江大学智能信息工程研究所);Rheodyne 7725i进样阀(Rheodyne公司)。L-乳酸(质量浓度0.3 g mL-1 , 日本武藏野公司);L-乳酸甲酯(质量浓度1.098 g mL- 1 , 日本武藏野公司);甲醇(CG );磷酸二氢钠(AR);磷酸(AR), 水为M ilipo re超纯水。

1. 2　色谱条件
Prevail C18分析柱(美国A lltech 公司);流动相:V[ N aH2PO4 /H3 PO4 缓冲液(pH2. 0)] ∶V (甲醇)=90∶10;流速:1.0 mL m in- 1;进样量:20 μL;R ID- 10A 示差折光检测器;柱温:室温。

1. 3　方法
1. 3. 1　对照品溶液的制备
精密量取乳酸对照品333.5 μL 和乳酸甲酯对照品91 μL, 置同一100 mL容量瓶中, 用流动相溶液溶解并定容至刻度, 得质量浓度为1.0 g L-1的混合对照品母液。再将该母液配制成不同质量浓度的对照品溶液, 备用。

1. 3. 2　样品溶液的制备
将发酵的粗L-乳酸提取液过滤, 在混合器中与甲醇混合后, 流经由D61树脂装填的固定化床柱式反应器, 在出液口直接取反应产物体系的混合液用流动相溶液准确稀释100倍, 用0.45 μm 微孔滤膜过滤, 备用。

1. 3. 3　流动相的配制
配制c(NaH2 PO4 ) =20mmol L- 1的水溶液, 用当信噪比为3, 乳酸的最小检测限为45 ng;乳酸甲酯最小检测限为23 ng。

2. 3　样品的测定
实验中, 以固定化床层高度为20 cm, 反应温度60 ℃, 物料流速1.0mL m in-1为反应条件, 乳酸与甲醇按不同摩尔比进行反应, 并对产物进行测定可知, 当乳酸量一定时, 随着加入甲醇量的增加, 乳酸的转化率上升, 当n (乳酸)∶n(甲醇) =1∶8时, 乳酸转化率可达到88.18%